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| 內容簡介： |
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《植物基因工程实验技术指南》是新编写的系统阐述植物基因工程实验技术的学术专著，与《植物基因工程实验技术指南》编委会于2014年出版的《植物基因工程》理论书配套使用。《植物基因工程实验技术指南》共新增18章，新编写内容占《植物基因工程实验技术指南》的2/3以上。每个实验除详细叙述实验操作程序外，还设有实验解析：分析实验结果，指出关键技术，解释实验原理，从而培养实验者举一反三的创新能力，做到学以致用。同时《植物基因工程实验技术指南》还汇集了国内外近期研发的许多新成果、新技术，引入了最新的图表及近三年的文献，在附录中收集了植物基因工程实验相关的最新数据资料、目的基因结构功能及实验试剂等，以便使用。
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| 目錄：
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目录前言第一篇 核酸分离提取技术第1章 微生物DNA提取技术 2实验1-1 大肠杆菌质粒DNA提取 21-1-1 质粒DNA小量常规提取法 21-1-2 质粒DNA小量试剂盒提取法 31-1-3 质粒DNA大量提取法 5实验1-2 农杆菌Ti质粒DNA提取 7实验1-3 农杆菌双元载体中mini-Ti质粒提取 7实验1-4 M13噬菌体DNA提取 91-4-1 M13噬菌体单链DNA提取 91-4-2 M13噬菌体RF DNA提取 9第2章 植物DNA提取 10实验2-1 植物细胞总DNA提取 102-1-1 可用于PCR的DNA微量制备 102-1-2 SDS法 102-1-3 CTAB法 112-1-4 高盐法提取多糖类植物总DNA 112-1-5 食用油中提取DNA的方法 12实验2-2 植物核DNA提取 132-2-1 核DNA的大量提取法 132-2-2 核DNA微量提取法 142-2-3 核DNA柱式抽提试剂盒法 152-2-4 核DNA磁珠法抽提试剂盒法 15实验2-3 植物叶绿体DNA提取 172-3-1 密度梯度离心DNase处理法 172-3-2 高盐低pH方法提取叶绿体DNA 182-3-3 多糖类植物叶绿体DNA分离提取 19实验2-4 植物线粒体DNA提取纯化 20第3章 植物RNA提取技术 22实验3-1 植物总RNA提取 223-1-1 异硫氰酸胍法 223-1-2 苯酚法 223-1-3 LiCl沉淀法 233-1-4 一步提取法 233-1-5 植物总RNA提取纯化试剂盒法 233-1-6 Fruit-mateTM for RNA purification法 243-1-7 RNAiso for polysaccharide-rich plant tissue法 253-1-8 TRIzol法 26实验 3-2 总RNA中mRNA的分离提取 273-2-1 层析法 273-2-2 poly（A）mRNA 提取纯化试剂盒法 273-2-3 MagnosphereTM UltraPure mRNA purification Kit法 28实验3-3 植物microRNA的提取分离 293-3-1 microRNA提取试剂盒法 293-3-2 miRcute miRNA 提取分离试剂盒法 30第4章 核酸提取物纯度、浓度及定量检测 32实验4-1 细菌DNA提取物纯度及浓度检测 324-1-1 分光光度（紫外吸收）法 324-1-2 琼脂糖凝胶电泳法 32实验4-2 植物DNA提取物纯度及浓度检测 334-2-1 分光光度（紫外吸收）法 334-2-2 琼脂糖凝胶电泳法 334-2-3 荧光光谱法 33实验4-3 植物RNA提取物纯度及浓度检测 344-3-1 分光光度（紫外吸收）法 344-3-2 琼脂糖凝胶电泳法 34第一篇主要参考文献 36第二篇 基因分离克隆技术第5章 目的基因的PCR扩增技术 38实验5-1 cDNA合成 385-1-1 AMV法 385-1-2 M-MLV法 385-1-3 第一链cDNA合成试剂盒法 39实验5-2 基因保守序列的PCR扩增 405-2-1 一般的PCR方法 405-2-2 PCR酶试剂盒法 405-2-3 PCR反应要素 415-2-4 PCR反应条件：温度、时间和循环次数 425-2-5 常用PCR反应试剂盒 43实验5-3 反转录PCR（RT-PCR）扩增技术 445-3-1 植物总RNA提取 445-3-2 反转录PCR（RT-PCR）扩增 445-3-3 一步法反转录PCR（RT-PCR）试剂盒法 45实验5-4 PCR扩增产物的克隆 465-4-1 平末端连接 465-4-2 TA克隆 52实验5-5 反向PCR（Reverse-PCR） 55实验5-6 实时荧光定量PCR 555-6-1 样品RNA的抽提 555-6-2 RNA质量检测 565-6-3 样品cDNA合成 565-6-4 梯度稀释的标准品及待测样品的管家基因（β-actin）实时定量PCR 565-6-5 制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板 575-6-6 待测样品的待测基因实时定量PCR 575-6-7 实时定量PCR引物 575-6-8 电泳 575-6-9 实时荧光定量PCR试剂盒法 57实验5-7 cDNA末端快速扩增技术（RACE） 595-7-1 总RNA的提取 595-7-2 反转录PCR 595-7-3 RACE方法扩增3′端 595-7-4 RACE方法扩增5′端 60第6章 基因芯片技术分离目的基因 63实验6-1 制备芯片 636-1-1 基片的制备 636-1-2 点样探针的制备 646-1-3 基因芯片点样 64实验6-2 样品制备 656-2-1 植物RNA提取 656-2-2 检测提取的RNA 656-2-3 纯化总RNA（Qiagen的RNeasy Mini Kit或Micro Kit） 656-2-4 纯化总RNA的定量检测 656-2-5 cDNA合成 656-2-6 纯化cDNA（Affymetrix GeneChip Sample Cleanup Module） 666-2-7 cRNA合成和纯化（GeneChip IVT Labeling Kit） 666-2-8 纯化cRNA的定量检测 676-2-9 片段化cRNA 67实验6-3 芯片杂交 67实验6-4 芯片图像处理 68实验6-5 芯片数据预处理 69实验6-6 芯片差异表达基因分析 69实验6-7 全基因克隆 69第7章 插入突变分离克隆目的基因 71实验7-1 T-DNA标签法 717-1-1 T-DNA载体的构建 717-1-2 对转化后代进行表型分析 717-1-3 对突变体进行遗传分析 717-1-4 PCR法分离T-DNA插入位点的侧翼序列 717-1-5 证实T-DNA的插入导致表型的变异 71实验7-2 转座子标签法 717-2-1 农杆菌介导法把转座子导入目标生物体 727-2-2 转座子的初步定位 727-2-3 转座子插入突变的鉴定及分离 727-2-4 转座子在目标生物体内的活动性能检测 727-2-5 分离克隆目的基因 72实验7-3 sAc/Ds双系统法 727-3-1 sAc的转化植株和Ds的转化植株的获得 727-3-2 转化株杂交，挑选杂合sAc和Ds的子一代植株 737-3-3 Ds在sAc产生的转位酶帮助下转座，产生表型突变株 737-3-4 建立对应于变异株的基因文库或cDNA文库 737-3-5 筛选对应的基因克隆并了解该基因的特征 737-3-6 回复突变株的获得 73第8章 图位克隆目的基因 74实验8-1 构建遗传作图群体 74实验8-2 筛选连锁分子标记 74实验8-3 突变基因的染色体初步定位 75实验8-4 基因精细定位 75实验8-5 构建基因组文库 76实验8-6 利用分子标记筛选基因组文库 76实验8-7 PCR扩增测序寻找突变位点 76实验8-8 基因组高通量测序寻找突变位点 76实验8-9 验证克隆基因的正确性 77第9章 基因文库技术分离目的基因 78实验9-1 cDNA文库构建 78实验9-2 BAC文库构建 80实验9-3 YAC文库构建 85实验9-4 TAC文库构建 89第10章 差异表达基因的分离技术 92实验10-1 差别杂交与扣除杂交 9210-1-1 原代目的基因培养 9210-1-2 总RNA提取 9210-1-3 层析法分离提纯目的基因 9210-1-4 制取cDNA探针 9210-1-5 cDNA扣除文库的构建 9210-1-6 cDNA扣除文库的扩增及初步鉴定 94实验10-2 mRNA差异显示技术（DDRT-PCR） 9410-2-1 总RNA提取 9410-2-2 RNA样品中微量DNA的去除 9410-2-3 建立反转录归类反应体系 9510-2-4 PCR选择扩增 9510-2-5 差别条带的回收 9510-2-6 回收条带的PCR扩增 9510-2-7 扩增产物的纯化 96实验10-3 代表性差异（RAD）和抑制性扣除杂交（SSH） 9610-3-1 总RNA提取 9610-3-2 磁性球珠分离mRNA 9610-3-3 抑制消减杂交文库的构建 9610-3-4 载体的连接及转化 9810-3-5 插入片段长度的蓝白斑筛选与鉴定 9810-3-6 菌体的培养与保存 9910-3-7 序列分析和序列提交 99实验10-4 交互扣除RNA 差别显示技术（RSDD） 9910-4-1 扣除杂交 9910-4-2 差异显示 9910-4-3 表达分析 100实验10-5 随机引物PCR的RNA指纹法 10010-5-1 RNA的提取和制备 10010-5-2 总RNA的DNase处理 10010-5-3 反转录及PCR扩增 10010-5-4 差异片段回收及克隆测序 101第11章 功能蛋白组技术分离目的基因 102实验11-1 用于双向电泳分析的植物总蛋白提取及浓度测定 10211-1-1 酚法提取植物总蛋白 10211-1-2 三氯乙酸沉淀法提取植物总蛋白 10311-1-3 植物总蛋白提取试剂盒法 10311-1-4 Bradford法测定蛋白质浓度 10511-1-5 蛋白质浓度测定试剂盒法 105实验11-2 双向电泳分离目的蛋白 10911-2-1 IPG胶条的水合和等电聚焦 10911-2-2 IPG胶条的平衡 11111-2-3 SDS-PAGE电泳 111实验11-3 双向电泳凝胶染色 11111-3-1 考马斯亮蓝染色法 11111-3-2 SYPRO Ruby染色法 11211-3-3 硝酸银（AgNO3）染色法 11211-3-4 考马斯亮蓝蛋白质染色试剂盒法 113实验11-4 用于质谱分析的多肽样品制备 113第12章 酵母双杂交系统分离克隆目的基因 116实验12-1 双杂交文库构建及筛选 116实验12-2 酵母双杂交文库筛选目的基因 11712-2-1 通过酵母配对来筛选目的基因 11712-2-2 通过共转化的方法筛选目的基因 119实验12-3 分析阳性相互作用 12012-3-1 营养缺陷型/报告基因表达/ 3 AT方法重测表型 12012-3-2 酵母双杂交相互作用基因的最终获得 121第二篇主要参考文献 123第三篇 DNA重组及载体构建技术第13章 目的基因克隆载体构建 126实验13-1 目的基因PCR扩增 126实验13-2 目的基因插入T载体 126实验13-3 目的基因与克隆载体的限制性酶切及回收 12713-3-1 平末端的限制性内切核酸酶单酶切 12713-3-2 黏性末端的限制性内切核酸酶单酶切 12813-3-3 限制性内切核酸酶双酶切 12813-3-4 试剂盒法回收酶切产物 12913-3-5 采用乙醇沉淀法进行酶切产物的回收 130实验13-4 目的基因与克隆载体的连接反应 130实验13-5 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 13113-5-1 化学法转化大肠杆菌感受态细胞 13113-5-2 电击法转化大肠杆菌感受态细胞 132实验13-6 目的基因重组克隆载体的鉴定 13213-6-1 重组克隆载体的PCR鉴定 13213-6-2 重组克隆载体的酶切鉴定 13313-6-3 菌落原位杂交鉴定重组克隆载体 13313-6-4 α-互补实验鉴定重组克隆
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